Hongos filamentosos y levaduras mediante Simplate

Recuento de hongos filamentosos y levaduras mediante el sistema Simplate

Recuento de hongos filamentosos y levaduras mediante el sistema Simplate

Apartados de este ejercicio

A. Sistema Simplate

Sistema Simplate
El Simplate consiste en una placa circular con 84 pocillos excavados, donde se añade la muestra, junto con el medio de cultivo correspondiente a cada recuento.
Los pocillos positivos se recuentan y el NMP se obtiene a partir de la tabla adecuada suministrada por el fabricante.		Ver tabla de conversión de Simplate
Pueden realizarse con Simplate los siguientes recuentos:
- Recuento de hongos filamentosos (mohos) y levaduras (el ejemplo de este ejercicio) - Recuento de aerobios totales - Recuento de coliformes y Escherichia coli - Recuento de Campylobacter spp

B. Preparación de la muestra

Pesada de la muestra (Ver vídeo)
Pesar 50 gramos de muestra.
Añadir 450 mL de diluyente: agua de peptona al 0,1%.
Homogeneizar en un agitador de paletas tipo Stomacher. Esta será una dilución 1/10
Preparación de diluciones decimales (Ver vídeo)
Si es necesario, preparar diluciones decimales seriadas a partir de la dilución 1/10. Para ello, tomamos 1ml de la dilución 1/10 y lo llevamos a 9ml de diluyente, homogeneizamos en un rotatubos y tenemos la dilución 1/100. Procederemos del mismo modo, a partir de la dilución 1/100, para realizar las diluciones sucesivas.

C. Procedimiento de siembra de las placas Simplate (Ver vídeo)

Preparación del medio de cultivo
Preparar "Supplement A" al 1%, poniendo 1ml de suplemento A en 100 ml de agua destilada estéril.
Resuspender el medio de cultivo para hongos filamentosos y levaduras con 9 ml de "Supplement A" al 1%.
Añadir 1 ml de muestra o de cada dilución al medio de cultivo resuspendido y mezclar bien.
Inoculación de las placas Simplate
Abrir la tapaderas de las placas y pipetear la mezcla en el centro de la placa.
Colocar la tapadera y distribuir el inóculo en todos los pocillos realizando círculos suavemente.
Llevar el exceso de inóculo a la cavidad que tienen una esponja.
Observar el color de fondo de los pocillos.
Incubar a 22-25ºC durante 56-72 horas.

D. Lectura e Interpretación de los resultados

Lectura e Interpretación de los resultados
Después del periodo de incubación, observar los pocillos que han cambiado de color. Contar el número de estos pocillos que presentan un cambio de color sobre el color de fondo de los pocillos tras la incubación.
Los cambios de color con frecuencia producidos por los hongos filamentosos son: rojo, negro, melocotón y naranja.
Usar la tabla de conversión Simplate para determinar el Número Más Probable de Unidades Formadoras de Colonias por placa (C).	NMP UFC/g o mL= C x D donde: C: Número Más Probable de Unidades Formadoras de Colonias por placa. D: Factor de Dilución
Multiplicar este número (C) por el factor de dilución (D) para obtener el Número Más Probable de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por gramo o mililitro de muestra.

E. Entrenamineto en la interpretación de resultados

Le aconsejamos (en el caso de no tener experiencia previa en la interpretación de los resultados) que se ejercite en la interpretación de estos ejemplos antes de contestar a las preguntas del supuesto práctico, comprobando su correcta interpretación haciendo clic en cada pregunta en la letra rosa que antecede a la opción que le parezca correcta.
En el siguiente ejemplo observamos los resultados obtenidos tras sembrar 1ml en placas de Simplate de hongos filamentosos y levaduras de la dilución 1/10 de una muestra.
Dilución	Resultados Ver tabla de conversión del NMP de Simplate
Dilución 1/10	Simplate hongos filamentosos y levaduras Hacer clic sobre la imagen para verla a más aumento
Preguntas
El Número Más Probable de Unidades Formadoras de Colonias por placa (C) es: a) C= 4 b) C= 8 c) C= 14 El número más probable de hongos filamentosos y levaduras por mililitro/gramo de muestra en este ejemplo es: a) 8 NMP UFC/g o mL b) 80 NMP UFC/g o mL c) 40 NMP UFC/g o mL

F. Supuesto práctico

Realizamos el recuento de hongos filamentosos y levaduras de dos muestras de harina utilizando el sistema Simplate que se ha descrito, los resultados obtenidos en el laboratorio se muestran a continuación:
Muestra #1
Dilución	Resultados Ver tabla de conversión del NMP de Simplate
Dilución 1/10	Simplate hongos filamentosos y levaduras Hacer clic sobre la imagen para verla a más aumento
Preguntas
1. ¿Cuál es el factor de dilución? a) D= 10 b) D= 1000 c) D= 100
2. El Número Más Probable de Unidades Formadoras de Colonias por placa (C) es: a) C= 0 b) C= 1 c) C< 1
3. El resultado del recuento de hongos filamentosos y levaduras por gramo de muestra en la muestra#1 es: a) 0 NMP UFC/g b) 1 NMP UFC/g c) <10 NMP UFC/g
Muestra #2
Dilución	Resultados Ver tabla de conversión del NMP de Simplate
Dilución 1/1000	Simplate hongos filamentosos y levaduras Hacer clic sobre la imagen para verla a más aumento
Preguntas
4. ¿Cuál es el factor de dilución? a) D= 10 b) D= 100 c) D= 1.000
5. El Número Más Probable de Unidades Formadoras de Colonias por placa (C) es: a) C= 15 b) C= 14 c) C= 12
6. El resultado del recuento de hongos filamentosos y levaduras por gramo de muestra en la muestra#2 es: a) 1,4 x 10³ NMP UFC/g b) 1,4 x 10⁴ NMP UFC/g c) 1,5 x 10⁵ NMP UFC/g

G. Comprobar respuestas